甲基化位点检测（MSP法）（编号：1207）

一、服务介绍

DNA甲基化是哺乳类动物一个重要的基因外遗传信号。有研究表明，DNA甲基化与大多数肿瘤的发生相关，抑癌基因启动子CpG岛的高度甲基化可引起抑癌基因表达沉默，细胞出现无节制生长，导致肿瘤的发生。目前，基因的甲基化研究主要结合亚硫酸氢钠处理和PCR技术，分为甲基化特异性PCR（Methylationspecific PCR,MSP）和硫化测序PCR（Bisulfite sequencing PCR, BSP）。

1、MSP：DNA经亚硫酸氢钠处理后，所有未甲基化的胞嘧啶发生脱氨基变为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶无此改变。DNA的甲基化差异转变为序列差异，设计两对分别针对甲基化与非甲基化等位基因的引物，结合PCR扩增就可以将甲基化与非甲基化等位基因区分开。这种方法灵敏度高，对DNA的质和量需要少。
2、BSP：甲基化的胞嘧啶在亚硫酸氢钠发生脱氨基后不会转变，用一对特异性引物扩增后测序，再与DNA原始序列比对确定甲基化位点。测序法克服了只能针对单个位点检测，并且这些位点必须是限制性内切酶识别位点的缺点，可以对任何基因序列甲基化状态进行检测。

二、实验内容

1、根据目的基因启动子序列设计相应的引物；

2、基因组DNA的提取和定量；
3、亚硫酸氢钠修饰基因组DNA；

4、修饰后DNA纯化回收；
5、结合实时定量PCR的qMSP；

三、客户提供

样品、基因名称、种属，甲基化区域或位点

四、公司提供

原始数据，实验结果，实验报告