v 新鲜组织
取新鲜组织(生物体死亡后尽快在10分钟内取材),组织块以PBS或生理盐水清洗干净,组织大小:2.0cm×2.0cm×0.5cm。 -80 ℃冰箱保存。
v 细胞样本
①胰酶消化贴壁细胞(如为悬浮细胞略去此步),离心沉淀细胞,弃去上清液;
② PBS洗2遍(离心管中加入PBS,反复吹打几次后,目视可见细胞层溶解完全,离心沉淀细胞,弃去PBS,重复一遍上述操作);
③ 向离心管中加入1ml PBS,反复吹打几次后,目视可见细胞层溶解完全,转移到1.5mlEP管中,离心沉淀细胞,弃去PBS;
④ -80℃保存。1×107个细胞/管
(全程使用的耗材要求无菌)
注意:不同蛋白组分需要相应的提取试剂,目的蛋白在哪里表达?磷酸化蛋白?