v 组织一旦离体,样本中的内源性RNA酶很容易引起组织自溶导致RNA降解,例如:肝脏、胰腺 、胸腺、脾脏、脑、脂肪、肌肉,所以务必先放入液氮或者RNAlater。细胞样本收集好,务必加入1ml trizol。
v 新鲜组织:取新鲜组织(生物体死亡后尽快在5分钟内取材),组织块以PBS或生理盐水清洗干净,组织大小:2.0cm×2.0cm×0.5cm
(1)迅速放入液氮,-80 ℃冰箱保存(2)如无液氮可选择RNAlater, -80 ℃冰箱保存
v 细胞样本
①胰酶消化贴壁细胞(如为悬浮细胞略去此步),离心沉淀细胞,弃去上清液;
② PBS洗2遍(离心管中加入PBS,反复吹打几次后,目视可见细胞层溶解完全,离心沉淀细胞,弃去PBS,重复一遍上述操作);
③ 向离心管中加入1ml PBS,反复吹打几次后,目视可见细胞层溶解完全,转移到1.5mlEP管中,离心沉淀细胞,弃去PBS;
④ 加入1ml trizol,吹打混匀,-80℃保存。1×107个细胞/管 (全程使用的耗材要求无菌)
? 或者培养皿吸掉培养基后,PBS洗两次,加入Trizol用细胞刮收集后-80℃保存
v 全血标本:取适量全血加入EDTA-Na2抗凝采血管(严禁使用肝素抗凝,因其对PCR扩增有抑制),-80℃冰箱保存;
v 血浆标本:取适量全血加入EDTA-Na2抗凝采血管,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清, -80℃冰箱保存;
v 血清标本:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清, -80℃
冰箱保存 。